酶诱导

在人肝细胞单层培养中暴露于试验品后，在体外测量CYP酶(通常为CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4)的诱导。

最初的实验应该研究诱导CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的潜力。如果观察到CYP3A4酶的诱导，发起者还应评估CYP2C酶(CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19)的诱导电位。然后将其效果与正在研究的CYP酶的阳性对照诱导剂引起的效果进行比较。此外，离体动物肝脏(通常是小鼠、大鼠、狗或猴子)可以加工成亚细胞组分，并用于评估试验品在体内给药期间对药物代谢酶的介导作用安全评价研究。

• 测试系统:冷冻保存的单个人类供体肝细胞
• CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4/5。
• 试验品浓度:选择用于标记预测的临床暴露(0.1 - 10X C_马克斯)，除非受溶解度限制。选择5个浓度用于细胞毒性，7个浓度用于mRNA诱导，3个浓度用于酶活性诱导
• 孵化时间:72小时，每24小时刷新一次培养基。

细胞毒性

在初步分析,从一个供体肝细胞培养的试验件(5)浓度或积极控制它莫西芬(50µM)一式三份井72小时37°C的湿润孵化器5%二氧化碳,与媒体交流±测试文章或控制每24小时发生。72小时后，使用MTS试验评估肝细胞的活力。结果将用于确定诱导试验的无毒试验品浓度。

稳定

与细胞毒性试验相结合，培养基样品被收集，以评估测试品的浓度随时间的推移。

CYP mRNA感应

肝细胞从三个捐助者孵化存在与否的测试条(7)浓度或控制诱导物(见下文)一式三份井72小时37°C的湿润孵化器5%二氧化碳,以交换媒介±测试文章或控件发生每24小时。72h后提取mRNA，实时荧光定量PCR检测基因表达。每个CYP mRNA的水平与内源性控制基因(如GAPDH)的水平标准化。然后使用2-ΔΔCT方法计算CYP基因表达的折叠诱导。与对照相比，CYP mRNA水平的检测文章依赖增加≥2倍，或响应≥20%的阳性对照，可能被解释为阳性结果。

CYP酶诱导

从三个捐助者肝细胞生长在测试条的存在与否(三个浓度)或控制诱导物(如上所述)一式三份井72小时37°C的湿润孵化器5%二氧化碳,与媒体交流±测试文章或控制每24小时发生。72小时后，肝细胞在含有适当CYP底物的新鲜培养基中孵育2小时，之后终止反应并采集样本，使用液相色谱-质谱(LC-MS)分析方法进行代谢物分析(见下文)。与对照相比，检测品依赖性的CYP酶活性增加≥2倍，或响应≥20%的阳性对照响应，可能被解释为阳性结果。

可交付成果

与已知的CYP酶诱导剂相比，这些测定将提供mRNA和酶活性水平。欧共体₅₀和E_马克斯如适用，将提供。

如果观察到阳性结果，定量药理学可能允许在评估临床试验的需要时提供额外的指导。