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反应表现型
反应表型研究评估了酶亚型特异性抑制剂对在混合的人肝微粒体中培养的亲本试验品消失的影响。用重组个体药物代谢酶异构体孵育可证实酶的活性。评估负责代谢试验品的酶可以突出潜在的责任，如由单一酶或多态表达酶催化的代谢路线。
反应表型研究的调节考虑
根据《药物-药物相互作用(DDI)指南》，为更好地了解药物的清除途径，建议对CYP酶(CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6和CYP3A)进行初步研究。如果这些主要CYP酶不参与药物的代谢，则应评估其他I期和II期酶，包括:
- CYP酶(CYP2A6、CYP2J2、CYP4F2、CYP2E1)
- 非cyp酶包括醛氧化酶(AO)、羧酸酯酶(CES)、单胺氧化酶(MAO)、黄素单加氧酶(FMO)、黄嘌呤氧化酶(XO)和乙醇/醛脱氢酶(ADH/ALDH)
- 结合酶包括UDP葡萄糖醛酸转移酶(UGT)和磺酸转移酶(SULTs)
反应表型提供了有关试验物品的部分代谢的信息，可用于评估受害者的DDI潜力，为临床研究设计提供信息，预测药代动力学中的个体变异，并评估遗传多态性的影响。
方法
- 测试系统:混合的人肝微粒体和重组个体表达的人酶和所需的辅助因子
- CYP亚型:CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4。(其他CYPs、UGTs和药物代谢酶也可用)。
- 异位特异性化学抑制剂和重组酶用于确认。
用微粒体在磷酸盐缓冲液中预培养试验品至少5分钟。试验品的代谢是通过添加NADPH或其他适当的辅助因子开始的。添加有机溶剂后终止孵育，然后使用液相色谱-质谱(LC-MS)对样品进行检测物品和/或其代谢物分析。
第一阶段-优化体外培养条件
在NADPH或其他适当的辅助因子存在下，测试品在不同浓度的微氨酸(通常0.1 - 1 mg蛋白/mL)中孵育4个时间点，最多60分钟。
控制孵化在没有辅助因子的情况下进行。微粒体浓度的培养条件和产生试验品消失线性速率的时间点被用来定义后续实验。
第二阶段——试验品代谢动力学分析
在优化条件下，三次使用至少八种试验品浓度的孵育样品中，监测试验品消失的速度。采用米切里斯-门腾曲线拟合方法对实验数据进行了分析m和V马克斯为试验品确定。
III期-使用cyp特异性化学抑制剂的抑制分析
试验品在
IV期-利用重组人CYPs进行代谢
试验品在
可交付成果
这些测定将鉴定酶负责和代谢程度的试验物品在体外。测定试验物品消失和/或代谢物形成的动力学。在体外代谢评估确定主要的酶参与，并提醒你潜在的体内清除机制的责任，在首次在人体内测试。
