深入研究肿瘤浸润性T细胞免疫表型

作者：

David Draper，博士，科学发展部副主任

日期：

2019年8月

流式细胞术使用大抗体面板的优点是检测更多的细胞亚群。当需要一个全面的数据集，但可用于分析的肿瘤材料有限时，这种能力尤其重要。此外，含有大量抗体的面板也可用于对少数亚群进行深入的免疫表型分析，或对单个亚群进行更深入的分析。在这个技术焦点中，我们通过展示使用新的扩展CompT生成的数据来展示后一种能力™ 面板，一个16色面板，对T细胞活化和分化进行流式分析，其水平高于Covance服务组合中的任何其他面板。

扩展组件™ 面板建立在CompT之上™ 小组，我们最流行的标准小组来检查CD4⁺和CD8⁺T细胞。这个改进的小组增加了效应和记忆T细胞标记，加上四个额外的标记分析T细胞活化和衰竭。表1描述了扩展CompT的组件™ 小组，并使用未经治疗的小鼠MC38结肠癌，图1说明了其门控和分析策略。

与所有Covance T细胞板一样，分析从死亡细胞排除和随后的CD45开始⁺免疫细胞在CD3上的定位⁺T细胞（未显示）。图1A显示了CD4的下游端点⁺和CD8⁺CompT之间共享的T细胞分析™ 和扩展的CompT™ 面板。这些包括CD69和PD-1，它们在T细胞活化时上调。它们的表达与耗尽的T细胞表型相关。^[1]另一个共享端点是CD8⁺通过使用Ki-67表达作为替代标记物来提供T细胞增殖。最后，CD4⁺检测T细胞以量化辅助性T细胞和调节性T细胞（Tregs）。图1B和1C说明了用于扩展CompT的添加端点™ 面板，下面将进一步介绍。

效应器和记忆CD8的分析⁺T细胞分化如图1B所示。在感染和癌症发病机制的背景下，T细胞向记忆表型的转化对于形成持久的免疫应答是重要的。CD44和CD62L分析可以将T细胞划分为四种分化状态。这些包括幼稚或失活的T细胞、活化的效应T细胞（Teff）、效应记忆（Tem）和中央记忆（Tcm）亚群。Tem和Tcm亚群可以循环，但分别存在于非淋巴组织和淋巴组织。^[2]最近的研究表明，这两个亚群在抗肿瘤反应中具有不同的作用。第三居民记忆（Trm）群体最近被描述为在多种模型中在控制肿瘤生长中发挥重要作用，并且可以使用CD103和其他标记物来描绘。^[3]扩展组件™ 面板可以定制为包括Trm细胞的分析。

扩展组件™ 小组包括ICOS、LAG-3、TIM-3和granzyme B分析，这是四种深入研究的T细胞功能性生物标记物（图1C）。单独或联合分析这些靶点可以深入了解CD8+T细胞的抗肿瘤潜能。有证据支持ICOS受体信号传导的协同刺激和抗肿瘤作用，从而使ICOS成为一个有吸引力的治疗靶点。[4]颗粒酶B通常被用作细胞溶解活性的生物标记物，并与CD8+T细胞抗肿瘤反应相关。相反，PD-1、LAG-3和TIM-3是抑制性受体，虽然这三种受体的表达与T细胞衰竭有关，越来越多的数据表明，在耗尽的表达PD-1的CD8+T细胞中，亚群之间存在异质性。[5]这种异质性与这些抑制性受体的表达模式相关。这一特征有助于定义不同的亚群，这些亚群具有不同的潜能，可以被重新激活以增殖和/或溶解肿瘤细胞。[6]图2说明了扩增的CompT™ panel可以量化抑制性受体双阳性和三阳性表达的细胞，并提供对异质性PD-1表达T细胞亚群及其功能的洞察。许多其他的T细胞活化和抑制受体已经被描述并与影响肿瘤免疫反应有关，包括TIGIT、OX-40、CD137、CTLA-4等。Covance在分析这些标记物方面有丰富的经验离体肿瘤分析。在最小的开发努力下，扩展的CompT™ 可定制以满足您独特的临床前需求。

Covance可以配置多达18种颜色的自定义面板，从而为MI扩展组件创建选项™ 面板。除了如前一节所述替代或添加不同的T细胞活化/衰竭标记外，NK/NKT细胞分析是一个潜在的有价值的终点。通过将CD49b/CD335标记物添加到面板（图3）来实现这一点。

NK和NKT细胞是IFNγ的重要来源，对增强CD8+T细胞抗肿瘤反应具有间接作用，并可通过释放细胞溶解颗粒（如颗粒酶B）直接溶解肿瘤细胞。[7,8]其他选择包括IFNγ、TNFα或其他细胞因子分析，以更深入地了解PD1+和PD1–CD8+T细胞。或者加上CD103分析来检测肿瘤中驻留的记忆T细胞是否有更深的记忆T细胞分布。科文斯的团队拥有丰富的开发定制流式细胞仪服务的经验。了解更多关于扩展CompT™ 小组可以纳入它到您的临床前研究，联系科文斯的科学家。yaboapp体育官网