多路复用IHC用于蛋白质表达,共表达的模式和空间关系

复用免疫组织化学(IHC)是利用单个抗原染色的基本概念在同一时间,以检测多个标记的检测。它允许过氧化物酶,碱性磷酸酶和其它共轭一次或二次抗体的标记的能力,并且可以使用几种常用方法包括间接或直接染色方案来实现。

作者:

Shayna多诺霍|副研究员,体外操作 - IHC

日期:

2018年4月

复用免疫组织化学(IHC)是利用单个抗原染色的基本概念在同一时间,以检测多个标记的检测。它允许过氧化物酶,碱性磷酸酶和其它共轭一次或二次抗体的标记的能力,并且可以实现使用几种常用方法包括间接或直接染色协议

研究人员一直在指导他们的重点是多重IHC由于使用多种抗体一次的许多优点。它使我们能够在同一时间聚集较高的数据量,同时节省宝贵的组织样本。空间数据可以用于目标相对于另一一种蛋白质以及成比例地组织结构或附近的是细胞器来获得。它经常被用来确定的子集免疫肿瘤标志物在肿瘤中,告诉我们一个更深入的故事,什么是在肿瘤环境中所发生的。多路复用IHC也成为确定细胞中标志物的共表达中起重要的解决方案。

图1:CT26肿瘤中CD3(粉红色)、CD4(绿色)、DAPI(蓝色)染色。
图1:CT26肿瘤中CD3(粉红色)、CD4(绿色)、DAPI(蓝色)染色。

多重IHC可以用多种协议,其中许多遵循相同的概念,单抗体染色方法来完成。其中一个方法可以包括间接IHC的不同变化。取决于测定设计,间接多路复用IHC可以使用具有缀合至荧光基团的二抗相同或不同的宿主抗体来完成。辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)缀合的次级抗体还可以用于检测与不同颜色的发色团的多个标记。由于多个第二抗体可以结合一个初级抗体,信号被放大从而允许低表达的蛋白质的容易可视化。

可以使用的另一种方法是直接的方法。而直接检测也可使用在同一主机或不同主机的初级抗体来实现,它提供了在测定设计更多的灵活性。有没有需要完成每个标记染色过程开始下一步骤之前或结合几种类型的整个过程阻断技术的。直接检测也是在蛋白标记方面是灵活作为初级抗体可以缀合有辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记。

图2:CD3(粉红色),CD4(绿色),CD45(红)和DAPI(蓝色)染色在CT26肿瘤。
图2:CD3(粉红色),CD4(绿色),CD45(红)和DAPI(蓝色)染色在CT26肿瘤。

Covance公司现在提供多达四色用偶联抗体复用和被不断努力来验证新复用选项,例如色原检测。优化的协议已经制定了关于债券RXM自动染色的一致染色和对VERSA的Aperio扫描仪获取数据的高分辨率图像。联系科文斯了解更多关于多路IHC定制标记请求以及我们的其他IHC服务

注:研究是在按照一个AAALAC认证的机构适用的动物福利法规进行