展示生物制药的效力对于毒品的成功发展和市场释放至关重要。对于治疗性抗体，与靶抗原的结合是其作用机制的第一步，因此是该产品的关键质量属性（CQA）。由于效力测定需要反映药物的作用机制，并且是可以与药物的最终临床疗效相关的唯一分析技术，所以需要表征与抗原的结合的要求。这形成了表征包的一部分以及先天免疫反应的组分，例如Fc受体和C1Q。
在整个药物开发生命周期中需要测量与靶抗原的结合，从初始克隆选择和继续进入市场释放。监管机构需要确定GMP下药品释放的目标结合（效力）（ICH主题Q6B;规格：生物技术/生物产品的测试程序和验收标准）。在整个产品生命周期中，可以使用不同的抗原结合测定，这取决于药物开发过程的阶段。实际上，在早期发展阶段，应探索正交效力方法以充分表征互动。这也将识别用于进一步发展的主要候选平台/分析。来自正交方法的数据还将提供所选择的释放测试的最终测定的支持证据。效力测定可以是配体结合测定，例如ELISA（酶联免疫吸附测定）和表面等离子体共振（SPR），或诸如基于细胞的测定和流式细胞术的功能测定。
在早期产品开发期间，重要的是完全表征治疗抗体与靶抗原的相互作用。标签自由系统，如表面等离子体共振（SPR）可以在相互作用的结合动力学中提供洞察力。这可以支持铅药物候选物的选择/优化，以确保结合特性，例如解离率/半衰期，匹配预期的作用机制。此外，标记无绑定测定可以提供快速的是/否答案，可用于通过确认药物与来自不同物种的靶抗原的相互作用来支持用于毒理学研究的物种选择决策。
虽然标签无结合测定可以提供有关蛋白质相互作用的丰富数据，但是所需的仪器通常是昂贵的并且与传统ELISA相比，吞吐量较低。因此，在药物开发的后期阶段生命周期，ELISA通常用于测量药物相对于良好的参考标准的药物的结合。根据作用机制，可以作为抗原结合测定或竞争/抑制测定来发展ELISA。
虽然配体结合测定能够测量治疗性抗体对其靶抗原的结合，但是还需要表征和监测由结合事件产生的生物活性。取决于作用机制，抗体与其靶抗原的结合可以触发或抑制各种效果，例如细胞增殖，细胞凋亡或分化。许多供应商正在提供报告基因测定，其通常具有基于定向细胞的测定的益处，例如降低发育时间，测定变异性和运行时间。然而，调节因子仍然要求来自报告基因测定的数据与测量药物生物活性的基于细胞的测定结果相关。因此，需要开发定制的基于细胞的测定以证明效力。可以开发这些测定以模拟作用机制，具有适当的终点来测量生物反应。
除了测量治疗性抗体批次的活性/强度外，效价测定还应能够通过区分靶标和降解产物来表明稳定性。因此，在强制降解和稳定性研究中需要效价测定。结合结构表征，配体结合和基于细胞的分析可以确定哪些降解途径，哪些氨基酸残基导致效价降低。此外，根据作用机制，配体结合分析可用于确定活性的丧失是由于抗原结合位点的降解，还是由于与先天免疫应答中Fc结合蛋白的结合缺失。
总结
效力测定是至关重要的，以充分描述结合相互作用的单克隆抗体的目标抗原。应该开发和研究效价测定矩阵，以生成定义药物作用机制的全面数据集。开发应在产品生命周期的早期进行，以确保该方法能够准确识别生产批次之间和稳定性研究期间的活性浓度变化。这也确保了一个全面的数据集是可用的，以充分描述所选择的释放测试，以确保方法是稳健的，适当的方法接受标准可以被应用。
由于细胞自由测定形式的复杂性较低，配体结合测定通常比细胞基生物测定更精确且可再现，因此更高的控制测试更具质量控制。由于这一点，验证的配体结合测定可以用作用于释放测试的基于细胞的生物测定的替代物。然而，这要求来自替代测定的数据通过与基于细胞的生物测定的相关性证实。因此，基于细胞的测定仍然是证明药物的作用机制和药物的生物活性至关重要。
