Syndecan-1（SDC1），也称为CD138，是众所周知的和特异性等离子体细胞标记物，其在多个骨髓瘤等离子体细胞的表面上高度表达。由于它可以是检测从骨髓（BM）吸气中获得的大部分细胞内的少量恶性血浆细胞的挑战，CD138等离子体细胞富集是将来自骨髓吸气物中的血浆细胞分离的关键。我们最近坐下了Janelle Salkowitz-Bokal，Phd，Maria Coronesi和Lucas Rifkin，MD，探讨CD138血浆富集如何增强多种骨髓瘤测试下游分析的灵敏度。
有针对性的细胞分离（TCI）
由于富集CD138细胞可以看到更高的多发性骨髓瘤浆细胞异常率，与常规培养的BM细胞相比，CD138富集已成为从荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)和流式细胞术等下游技术获得可靠数据的主要手段。Covance靶向细胞分离(TCI)团队使用免疫磁细胞分离技术补充下游分析。(参见专栏1了解Covance TCI能力。)通过这种方法，来自原代骨髓单个核细胞(BMMC)和外周血单个核细胞(PBMC)样本的CD138+浆细胞可以通过在细胞表面与CD138亲和的抗体复合物靶向，使标记细胞与磁颗粒交联，实现阳性选择免疫磁细胞分离。Covance通过使用Miltenyi Biotec Microbeads对BM分析物进行CD138磁性细胞分离来实现这一目标。当样品置于磁场中时，磁性标记的细胞被保留，而未标记的细胞被移除。
TCI技术:过去和现在
在密封过程中，Cocance的TCI技术的变化大大降低了细胞分离过程中的血浆细胞的损失。以前，使用2步工艺从BM吸气物中分离出血浆细胞;通过第一步，涉及分离BMMC，然后分离等离子体细胞。使用直接®微生物的转变使得直接从BM吸气的血浆细胞分离的更快速和有效的过程，导致血浆细胞的损失很小。Covance的研究表明，通过使用直接的微珠，可以从少量为<1％的BM吸气，产生高达40％的CD138 +血浆细胞富集。
Covance的技术人员使用基于柱的技术，具有纳米大小的超顺磁珠和放大的磁力。通过最小的标记，对细胞特征没有改变，并且没有无特异性标记的靶细胞分数。
所有五个中央实验室位置可用的流式细胞仪
在细胞富集过程之后，可以用流式细胞术确认正级和负级分的纯度。这允许在进一步下游分析之前排除血浆细胞，这可能是一些临床研究的要求。在许多情况下，流式细胞术被视为对富集过程和整体工作流程的关键伴奏。
在科万斯中心实验室的全球网络中，可以使用广泛的流式细胞技术，其中一个由训练有素的操作人员、数据分析师和验证科学家组成的专门团队在控制技术可变性和确保高质量的结果方面发挥着关键作用。Covance实验室的仪器包括FACSCanto™II, FACSLyric™和Bio-Rad ZE5。此外，委员会认证的，专门训练的血液病理学家解释流式细胞术的结果，包括对浆细胞肿瘤的最小残留疾病的评估。所有有问题的数据都由经验丰富的TCI科学团队进行内部审查，以确保采用专家解释。
流式细胞术定量分析作为标准实践
在进行临床研究时，重要的是确保使用第一BM吸气剂作为等离子体电池的源，或者未通过它，针头被重新定位，以便获得新的绘图。这是最大限度地减少血液稀释风险所必需的。这些建议组成了一部分关于在多发性骨髓瘤中进行界面鱼类测试的共识指导。在考虑的情况下，在各种情况下进行血浆细胞的流式细胞级定量分析。因此，可以放心赞助商对研究中使用的样品的有效性。我们了解如何用于限制外周血含量的技术以及因此支持您的研究的血浆细胞收集的重要性。
提高准确性和吞吐量
验证Beckman Coulter Cytoflex系统
当使用CD45和7-AAD（Duraclone IM计数管）与台盼蓝禁止方法评估PBMC计数和活力时，已经显示流式细胞仪提供更大的准确性。绝对计数由每管数量的已知数量的荧光珠，并使用数学公式进行特定的门控事件。Covance现在在每个全球位置提供Cytoflex流动仪器仪器 - 新加坡，上海和东京有两种乐器，以及日内瓦和印第安纳波利斯的三种乐器。
Covance目前正在全球范围内通过流式细胞术验证CD138的数量、活力和纯度。预计在2021年1月完成对所有TCI工艺的CytoFLEX面板的验证过程。这为赞助商提供了一个令人兴奋的发展，因为结果将更加准确和实时可用。
自动化PBMC隔离
Covance还验证了仪器，以支持自动化PBMC隔离，以提高效率，并节省宝贵的动手时间。自动化PBMC隔离是该领域的关键创新，目前是Covance独有的。它旨在提高吞吐量，并帮助维持最佳存活率并恢复冷冻保存的PBMC。Covance团队预计将在印第安纳波利斯网站举行Q1，2021年的这项服务。
在稳定时间范围内全球运输样本
BM样品在采集后只能保持稳定长达48小时，由于BM样品不能被冷冻，因此BM抽吸液迅速转移到实验室进行处理是至关重要的。这是在科万斯通过超过50名物流专家的全球团队实现的，以确保准时和不稳定的发货。
等分试样后，获得等离子体样品并在干冰上迅速冷冻，然后可以将它们送至其中一个中央实验室以进行后续鱼类分析和解释。重要的是，在我们高度训练的解剖病理学和组织学（APH）团队的主持下，这些样品也可以稳定并储存长达三个月。
尽管Covid-19，持续的行动
Covid-19继续影响全球的社区和医疗保健系统。但是，由于稳健的业务连续性计划和高技能的物流专业人才，Covance处于一个独特的位置，可以向多个全局位置提供样品发货，确保满足示例稳定性时间帧。当涉及到BM Absirates的短暂稳定性时，这尤其重要。
效率，可靠性和稳健的临床解释
通过与科万斯合作，支持您在CD138浆细胞富集方面的工作，您可以确保您的关键临床试验结果所依赖的浆细胞样本的高质量。我们采用最新的技术，在我们技术人员的专家见解和指导下，为您的数据和研究带来高效、可靠和稳健的临床解释。从最初的样本收集一直到提供研究结果，您可以对我们严格的、记录良好的实践充满信心。
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