了解EOGRTS复杂性和顺利完成化学注册的五个关键成功因素

EOGRTS或OECD 443是一项科学和逻辑上复杂的研究。五个关键的成功因素可以帮助您克服复杂性，以实现DART的成功。

是什么让EOGRTS如此具有挑战性？

EOGRTS或延长的一代生殖毒性研究评估了孕期和哺乳期女性以及年轻和成年后代在出生前和出生后暴露于化学品以及全身毒性所产生的生殖和发育影响。EOGRTS测试指南——经合组织甘油三酯443¹–于2011年被经合组织采纳，取代之前的两代生殖毒性研究–经合组织TG 416–成为欧洲化学品管理局（ECHA）REACH（化学品注册、评估、授权和限制）注册所需的研究。然而，OECD 416仍然是一个有效的测试指南。OECD TG 443相对于OECD TG 416的优势在于：更具针对性地培育F1代，以评估可疑的生殖毒性，如果需要，能够检查F1代的多个终点，以及减少试验动物的使用。事实上，与OECD TG 416相比，EOGRTS可以减少约40%的动物使用量。

因此，OECD TG 443研究设计非常复杂。它们涉及交配和F0亲本世代（P）的检查，评估F1代后代的多个终点，如果触发，繁殖F1代以产生F2代。¹这项研究需要强有力的研究设计，精心规划的触发繁殖，专业的动物管理和强有力的抽样和分析方法。归根结底，它们需要比之前的OECD TG 416更多的资源和时间，这意味着它们是一项巨大的投资，你需要把它做好。

关键成功因素1：利用初步研究优化EOGRTS设计

具有讽刺意味的是，正是EOGRTS核心的灵活性使其如此复杂。EOGRTS的特点是能够根据特定的标准构建触发器，当观察到这些触发器时，可以启动F2代的繁殖和/或F1代中多个端点的评估。OECD 443存在多种方案，但总的来说，断奶后，F1代分配给队列如下：

• 1A组：整体试验组，对雄性和雌性进行毒理学和生殖终点检查
• 第1B组：如果需要，用于繁殖F2代的“备用”动物组
• 2A组：成年后进行发育性神经毒性（DNT）测试的组，如果触发
• 2B组：断奶时评估DNT（如果触发）
• 队列3：评估发育免疫毒性（DIT），如果触发

为了从你的EOGRT中获得最高水平的成功，你需要有正确的研究设计，并考虑如何最好地避免可能的下游挑战或延误。

基于OECD TG 443协议的实例研究设计

图1-3显示了一些在Covance常规开发和使用的研究方案变体。图3遵循建议的ECHA方法。

利用初步研究提高EOGRTS的成功率

为了最大限度地提高EOGRTS的成功率，通常建议首先进行一项可靠的剂量范围研究。这将确定任何可能危及研究可行性的不可预测问题，如先前未确定的产仔数减少或后代死亡率增加。由于许多化学品可能限制了现有的发育和生殖毒理学（DART）数据，本初步研究也有助于您在开始主要研究之前评估对EOGRT至关重要的终点。此外，它还支持适当的剂量选择，并标记应包括的任何可能的评估。

例如，如果在F0动物中记录到剂量相关和受试品相关的胸腺重量减少，则在EOGRTS研究中包括第3组（DIT）可能是谨慎的，即使最初没有ECHA等监管机构的要求。同样，如果在初步研究中观察到F1子代出现意外的神经毒性迹象，如试验品相关的震颤或抽搐，则应谨慎地纳入F1第2组（DNT）。注册人可自由扩展EOGRTS，以解决ECHA决定发布后发现的问题。

剂量范围研究的推荐终点包括交配成功率、生育率、产仔数和幼崽存活率，包括评估妊娠期和哺乳期幼崽的暴露情况，重要的是，断奶后直接治疗幼崽的效果。

关键成功因素2：利用专业动物技术人员的专业知识，选择正确的试验模型并加强研究安排

你的研究设计会影响你为EOGRTS选择的啮齿动物模型。对于基于REACH的标准EOGRTS设计，即没有DNT和DIT队列，则Han-Wistar或Sprague-Dawley大鼠品系是合适的。Sprague-Dawley大鼠被推荐用于OECD TG 443的完整研究，包括DIT和DNT队列，因为它有更大的产仔数和平衡的性比后代。

除了选择正确的啮齿动物品种，你还可以受益于专业的动物技术人员谁可以预测和管理交配。这可以支持学习安排，简化资源使用，提高学习计划和执行的效率。此外，由于可以使用多代动物，因此必须按照最高的福利标准处理母鼠、胎儿和幼崽；这意味着要考虑产仔和个别动物的健康。

关键成功因素3：确保你有正确的测试剂量和给药途径

需要进行初步工作，以确定适当的剂量水平在女性乱扔垃圾。建议收集毒代动力学数据，以评估哺乳期和青春期胎儿和后代的潜在暴露。最高剂量水平通常会引起一些全身毒性或处于毒代动力学暴露变得非线性的水平，以小于10倍的间隔选择两个或多个较低剂量，以确定未观察到的不良反应水平（NOAEL）值。

在考虑试验剂量给药途径时，应考虑与人体接触最相关的途径。例如，如果人体的主要接触途径是通过吸入，吸入剂量可能是合适的。这需要特别考虑；尤其是全身吸入需要父母和幼崽同时接触，以避免家庭群体分离，这可能导致通过皮肤和口腔途径接触。

还有其他考虑因素，包括是否可以通过分娩和新生儿期继续给母鼠口服（通过灌胃、通过食物或饮用水），以及后代是否通过母乳接触受试物质。如果这一点不清楚，可以考虑在断奶前阶段直接给幼崽喂食。给幼崽喂食在技术上和后勤上都很复杂。

关键成功因素4：了解触发因素，并准备好可靠的评估技术和资源来衡量它们

有一系列可能的情况可以预先确定将2A、2B或3组纳入研究设计（基于先前的毒性信息），或者可以根据研究中对F0和F1成虫或F1后代的观察触发F1代的繁殖（表1）。在研究中，诱因大致分为两类：一类是可能预测后代毒性的效应；另一类是引起对后代发育担忧的成人效应。

必须了解触发因素，并制定必要的评估方法，以确保对其进行有效评估。

特定EOGRTS队列的组织病理学时间表

随着动物和队列数量的变化，利用尸检和组织病理学来支持你的研究是很重要的。表2给出了个体队列的估计组织病理学时间。还记得让铅在大约12周的时间，在科文斯这是8个星期的小伙伴。

关键成功因素5：利用法规洞察力规划和设计EOGRTS，以满足您的全球注册目标

EOGRTS评估需要男性和女性性互动的生殖终点，而其他生殖毒理学研究没有评估这些终点。一般来说，如果重复剂量研究（OECD TG 422）或短期内分泌干扰物筛选研究的结果表明存在可能的生殖毒性问题，则可能需要这些研究。不同的监管机构对F1育种有不同的意见，所以你需要考虑到你的长期全球发射战略提前最大化你的EOGRT的价值。

对于欧盟注册，ECHA根据所有可用的毒性数据规定您的电子口岸设计。在为该管辖区规划研究时，增加或更重要的是遗漏额外的2组（神经毒性）和3组（免疫毒性）的充分和有力的理由是一个极其重要的方面。对于随后在美国和加拿大的注册，重要的是要有全面的理由支持纳入或排除繁殖F1代动物，并建立研究内触发因素来支持这一点；这些在经合组织指导文件117中有明确的规定。^三

EOGRTS的时间尺度各不相同，所以要做好准备

EOGRTS的总长度取决于触发因素以及预处理的程度（表3）。正如你所看到的，一些学习时间可能需要一年才能完成，所以你需要适当的计划。

结论

OECD TG 443或EORGTS评估化学品对几代试验动物性功能和生育能力的潜在影响。为了取得OECD TG 443研究的成功，您需要遵循以下五个关键成功因素：

1. 使用初步研究来优化您的EOGRTS设计
2. 利用专业动物技术人员的专业知识，选择合适的试验模型并加强研究安排
3. 确保你有正确的测试剂量和给药途径
4. 了解触发因素，并准备好可靠的评估技术和资源来衡量它们
5. 利用法规洞察力规划和设计EOGRTS，以满足您的全球注册目标

如果您与具有科学见解、敬业和经验丰富的团队以及卓越的学习后勤和执行能力的提供商合作，则可以实现这一目标。

要了解更多信息，请阅读我们最新的电子书，EOGRTS–你需要知道的是：了解你的物质的复杂性并克服挑战。

动物福利的考虑必须包括在研究设计和研究行为。动物护理和研究必须按照所有适用的动物福利条例进行。

---

工具书类

1. OECD第443号试验：延长一代生殖毒性研究。https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-443-extended-one-generation-reproductive-toxicity-study_-en
2. 摩尔NP，等. 延长一代生殖毒性研究队列选择指南（OECD试验指南443）。监管毒理学和药理学2016; 80: 32–40.http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/s02733001630157x)
3. 经合组织。美国和加拿大关于延长一代生殖毒性研究的试验指南443中内部触发因素当前实施的指导文件117。http://www.oecd.org/chemicalsafety/testing/48516094.pdf

---

缩写

发育和生殖毒理学

发育免疫毒性

发育性神经毒性

欧洲化学品管理局

扩展的一代生殖研究

NOAEL：未观察到不良反应水平

经合组织：经济合作与发展组织

REACH：化学品注册、评估、授权和限制

构效关系

T4：甲状腺素

促甲状腺激素