通过ELISPOT和Fluorophot测量肿瘤抗原特异性免疫

作者：

David Draper.

日期：

2020年3月

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肿瘤抗原特异性反应的增强是免疫疗法的预期结果。通过急性增加的抗肿瘤免疫或形成长期免疫记忆，成功提升宿主自适应免疫反应的药物有更好的临床成功机会¹。虽然可以测量抗原特异性的许多测定，但其中许多具有限制，因为它们需要使用模型特异性试剂，转基因动物或细胞次集纯化步骤。Covance临yaboapp体育官网床前肿瘤通过ELISPOT / FluoroSpot分析提供了一种简单且实惠的解决方案。

ELISPOT和FluoroSpot使用Sandwich ELISA的技术来测量产生和释放可溶性目标的细胞的频率。商业套件可用于测量包括细胞因子，趋化因子，免疫球蛋白，生长因子等的目标。在Covance，我们提供单色酶联免疫点分析，对一个靶（ELISPOT）以及同时的多色荧光 - 基于多色荧光分析，同时为多达3个靶标的分析（含氟部分）。图1中示出了图1中示出了用于分析肿瘤特异性IFNγ和IL-4产生细胞的含氟分子程序的示意图。

在这项技术的聚光灯中，我们使用Hepa1-6-Luc鼠肝细胞癌模型展示ELISPOT / Fluorospot在临床前免疫肿瘤学研究中的应用（图2）。yaboapp体育官网为此，使用含氟光照，我们测量肿瘤患者外周血的肿瘤特异性免疫并显示体内用抗PD-1治疗检查点抑制增加了产生IFNγ的循环肿瘤特异性细胞的数量。此外，抗PD-1从IFNγ/ IL-4细胞因子曲线从免疫抑制反应转移到更炎症和抗肿瘤签名的免疫抑制反应。

类似于疫苗的作用机制，一种生长的肿瘤引发了一种适应性免疫应答，其由产生肿瘤特异性细胞的抗体和细胞因子组成¹。响应的质量可以通过检测IFNγ和IL-4来表征。IFNγ已被良好记录以通过通过细胞毒性增强T细胞介导的T细胞抑制肿瘤生长。相比之下，IL-4通过各种免疫抑制作用促进肿瘤生长。这种二分法通常被称为th1 / th2平衡²。如图2所示，抗PD-1增加了产生IFNγ的肿瘤响应细胞的频率离体刺激。相比之下，IL-4产生细胞的频率没有显着增加，表明检查点抑制引发了抗肿瘤保护性免疫的增强。为了支持这一点，具有IFNγ的最高频率的小鼠，产生具有最小卷的肿瘤。此外，抗PD-1增加了IFNγ/ IL-4产生细胞的比例，其在具有最小肿瘤的小鼠中再次最明显。

在一起，该数据集展示了ELISPOT / Fluorospot如何进一步揭示对肿瘤特异性免疫应答的药物影响。此外，因为可以用小体积的血液进行测定，所以ELISPOT /氟光口可以纵向施加效力臂。因此，提供了在不添加第二个采样臂的药物活动上获得机械洞察的机会的机会。有关ELISPOT / Fluoropot如何应用于您的临床前肿瘤和免疫肿瘤学研究的更多信息，请联系COVANCE临床前肿瘤科学家。yaboapp体育官网

参考：

^1。免疫;52.1（2020）：36-54

^2。癌症免疫学，免疫疗法;57.8（2008）：1125-1136。